Comparación in vitro de dos medios de diferenciación osteogénica en células madre de pulpa dental humana para su aplicación en regeneración ósea periodontal

Gutiérrez Rivas, Delia Eunice (2015) Comparación in vitro de dos medios de diferenciación osteogénica en células madre de pulpa dental humana para su aplicación en regeneración ósea periodontal. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Introducción. Las enfermedades periodontales que llevan a la destrucción de los tejidos de soporte, son la principal causa de la pérdida dental en adultos. La pulpa dental, contiene células progenitoras que contribuyen a la regeneración de dichas estructuras. Objetivo. Observar in vitro el potencial osteogénico de las células madre de la pulpa dental (CMMPD) empleando dos medios de osteodiferenciación, con la finalidad de aplicar la terapia celular como una opción en la regeneración de los defectos intraóseos periodontales. Métodos. Se obtuvieron CMMPD de 20 premolares extraídos por motivos ortodónticos. Se evaluaron 2 medios de osteodiferencación: uno tradicional (MT) y otro de patente (MP) a los 6, 12, y 18 días, teniendo un cultivo de CMMPD en medio de crecimiento como un grupo control (GC). Las células se tiñeron con Rojo Alizarina y eosina con DAPI a los días 6, 12 y 18, para observar que acúmulos de mineralización y su morfología. Los sobrenadantes de los tres grupos fueron recolectados para ser analizados por medio de electroforesis en geles de poliacrilamida. Resultados. El MP registró pequeños nódulos de mineralización desde el día 6 siendo más evidente en el día 18, donde abundaba material calcificado, mientras que en la autofluorescencia se observó el cambio morfológico característico de osteoblastos a partir del día 6. El MT registró pequeños nódulos hasta el día 18. La electroforesis demostró que el MP ya no presentaba liberación protéica a diferencia del resto de los grupos lo que significa que las proteínas óseas ya se encontraban incluidas dentro de la matriz ósea en formación, es decir, tejido mineralizado. El grupo control no presentó mayores cambios además de la proliferación. Discusión y conclusiones. El medio de patente (OsteoDiff, Miltenyi Biotec), resultó ser más eficiente debido a que las CMMPD registraron una formación más rápida de tejido óseo comparado con el medio tradicional de osteodiferenciación con dexametasona. Éste medio agiliza tiempos de cultivo de células osteoprogenitoras, por lo tanto, permitirá que la terapia celular en los defectos intraóseos periodontales sea una alternativa accesible y se sume a los tratamientos existentes. ABSTRACT Background: Periodontal diseases that lead to destruction of the supporting tissues are the main cause of dental loss in adults. Dental pulp contains stem cells that take part in the regeneration of such structures. Purpose: To obseve in vitro the osteogenic potential of dental pulp stem cells (DPSC’s) using 2 osteogenic media in order to apply the cell therapy as a treatment option of periodontal intraosseous defects. Methods. DPSCM’s were obtained of 20 extracted human premolars due to orthodontic reasons. 2 osteogenic media were evaluated: a traditional media (TM) and a commercial media, OsteoDiff by Miltenyi Biotec (CM) at days 6, 12 and 18 of osteogenic differentiation. A regular DPSC culture was chosen as a control group (CG). The 3 groups were stained with Alizarin Red and autofluorescence microscopy with eosin and DAPI as counterstaing; and the supernatant of the 3 groups was collected to analyze the protein expression by gel electrophoresis at days 6, 12 and 18. Results. CM presented small mineralized nodules since day 6, being increased on day 18, where the calcified material was abundant and also, a distinctive change to an osteoblast-like morphology was observed. TM exhibited small nodules until day 18. The electrophoresis analysis indicated that unlike the other media, CM did not liberate proteins on an active way, instead, probably they were already incorporated in the bone matrix in formation. Besides proliferation, nothing changed in CG. Discussion and conclusion. The CM (OsteoDiff, Miltenyi Biotec) resulted in an efficient osteogenic media because DPSC’s registered a rapid cell differentiation thus, a faster formation of mineralized nodules compared with TM. CM reduces the timing of osteogenic differentiation, and in consequence, cell therapy could be an attainable option to treat intraosseous periodontal defects.

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