Producción de la hormona del crecimiento humana en Escherichia coli marcada con SmbP y CusF3His+

Pérez Pérez, David Antonio (2017) Producción de la hormona del crecimiento humana en Escherichia coli marcada con SmbP y CusF3His+. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Propósito y Método de Estudio: Actualmente alrededor de 200 proteínas han sido aprobadas como biofármacos y algunas otras se encuentran en estudios preclínicos y clínicos. El coste principal en la producción de este tipo de proteínas en E. coli es la formación de cuerpos de inclusión y el proceso de purificación. Para disminuir los cuerpos de inclusión y facilitar la purificación se usan proteínas de fusión. En este estudio se probaron dos nuevas proteínas de fusión PelB-SmbP y CusF3H+ para la producción de un metabolito de importancia farmacéutica como lo es la hGH. La metodología consistió en: construcción de plásmidos, transformación en la cepa DH5α, extracción de ADN plasmídico, transformación en la cepa BL21(DE3), expresión de proteínas, purificación de proteínas mediante cromatografía de afinidad por metales inmovilizados y caracterización de la hGH. Contribuciones y conclusiones: Se obtuvieron dos construcciones (PelBSmbP-hGH y CusF3H+-hGH) para la producción de hGH en E. coli. Tanto PelB-SmbP como CusF3H+ demostraron ser efectivas para la producción de hGH ya que con ellas se obtuvo proteína soluble. Ya que las proteínas de fusión utilizadas en este proyecto son afines a diversos metales entre ellos Ni(II), se puede usar cromatografía de afinidad para su purificación facilitando en gran medida este proceso. Este proyecto describe una estrategia eficiente para la expresión y purificación de la hGH.

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