Potencial de nanopartículas de quitosano como inductor de diferenciación de monocitos humanos a células dendríticas.

López Pacheco, Edgar (2016) Potencial de nanopartículas de quitosano como inductor de diferenciación de monocitos humanos a células dendríticas. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Las células dendríticas son presentadores de antígenos conocidos como centinelas inmunológicos. Su capacidad para procesar y presentar antígenos son las bases de la inmunoterapia contra el cáncer utilizando este tipo de células. Este tipo de inmunoterapia involucra generar células dendríticas a partir de monocitos de sangre periférica en un periodo de cultivo de 5 a 7 días utilizando citocinas recombinantes y antígenos. Una vez que estas células se capacitan in vitro, son reinfundidas al paciente con el fin de estimular a los linfocitos T y así levantar una respuesta citotóxica en contra de las células cancerosas. Aunque este procedimiento posee ventajas como lo es la nula toxicidad hacia el paciente atribuida a la naturaleza autóloga de las células a reinfundirse, el alto costo del tratamiento limita la disponibilidad del mismo a personas de nivel socioeconómico bajo y medio. Debido a esto, la búsqueda de nuevas moléculas de bajo costo que sean capaces de inducir diferenciación celular son necesarias. A pesar de que muchos biomateriales (alginato, agarosa y quitosano) son capaces de sobrexpresar marcadores específicos de células dendríticas, el quitosano ha sido el más estudiado debido a su biocompatibilidad y nula toxicidad. Este ha sido evaluado como una película fina sobre monocitos aislados de sangre periférica humana y células dendríticas inmaduras de ratón procedentes de medula ósea en combinación con IL-4 y GM-CSF. Del mismo modo, su efecto a escala nanométrica ha sido estudiado sobre células dendríticas inmaduras aisladas de bazo de ratón. A pesar de que el potencial del quitosano para sobreexpresar marcadores específicos de células dendríticas ya ha sido evaluado, actualmente no hay estudios que evalúen el potencial de las nanopartículas de quitosano como agente inductor de diferenciación de monocitos humanos hacia células dendríticas sin hacer uso de citocinas recombinantes. En la presente investigación, se sintetizaron nanopartículas de quitosano mediante gelación iónica. Se obtuvieron nanopartículas de 208 nm de tamaño promedio, con carga superficial positiva y de morfología irregular. Los niveles de endotoxina de las mismas resultaron encontrarse dentro de los límites permisibles establecidos por el departamento de salud y servicios humanos de los Estados Unidos. Se aislaron monocitos humanos de sangre periférica utilizando ficoll. Las células obtenidas fueron tratadas con nanopartículas solas (0.30 mg/mL) o en combinación con albumina de pollo (1 mg/mL) y un adyuvante (Hemocianina: 10ng/mL) durante 7 días. El análisis de citometría de flujo reveló que las células tratadas mostraron un incremento de expresión de marcadores celulares involucrados en señales co-estimuladoras (CD80), maduración de células dendríticas (CD83), presentación de antígeno (HLA-II) y moléculas involucradas en la fijación de lipopolisacárido (CD14). El ensayo FITC-dextran demostró la capacidad de las células para realizar el proceso de fagocitosis, mientras que el análisis morfológico (60X) reveló células con prolongaciones celulares y pseudópodos.

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