Evaluación de daño cromosómico específico mediante DBD-FISH en pacientes con cáncer bucal.

Garza Molina, Jorge Guilibaldo (2016) Evaluación de daño cromosómico específico mediante DBD-FISH en pacientes con cáncer bucal. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

En los últimos años se ha incrementado a nivel mundial el cáncer de las vías aerodigestivas, con una incidencia anual global de 400,000 personas. Los principales factores de riesgo son la exposición a tabaco y alcohol, sin embargo recientemente se ha reportado la presencia del virus del papiloma humano (VPH). Existen diferentes técnicas capaces de detectar y medir roturas en las cadenas de DNA, que se han utilizado para buscar biomarcadores de detección, por ejemplo la técnica de micronúcleos, aberraciones cromosómicas estructurales, intercambio de cromátidas hermanas, entre otras. La técnica de reciente desarrollo denominada DNA breakage detection-fluorescence ‘in situ’ hybridization (DBDFISH) permite evaluar en forma sensible y específica el daño al DNA de la célula inducido por diferentes agentes, ya sea en todo el genoma o en secuencias específicas de DNA, lo que convierte al DBD-FISH en una técnica de gran utilidad en estudios de nutrición (estilos de vida), estudios epidemiológicos en poblaciones expuestas a un contaminante determinado, así como en carcinogénesis oral. El objetivo de este estudio fue evaluar el daño al DNA en genoma completo en epitelio bucal de pacientes con cáncer bucal respecto a un grupo “control” mediante la técnica de DBD-FISH, así como determinar la presencia de VPH en muestras de epitelio bucal sano y proveniente de pacientes con cáncer bucal. Para ello fueron colectadas muestras de epitelio bucal de 38 pacientes con cáncer bucofaríngeo y 10 muestras de pacientes sanos, que fueron usadas como control. Las muestras fueron procesadas mediante la técnica DBD-FISH descrita en la literatura y finalmente se realizó la captura y análisis de imagen. Por otro lado se realizó la extracción del DNA de las muestras y se realizó el análisis de secuencias del VPH a través del kit comercial Inno-LiPA VPH (Innogenetics NV, Ghent, Belgium). Los resultados del DBD-FISH revelaron que todas las muestras analizadas dieron una señal fluorescente, en las células sanas el marcaje se consideró como daño basal, mientras que la densidad integrada de fluorescencia fue significativamente mayor en células de los diferentes tipos de cáncer bucal. Finalmente se logró la detección molecular del VPH solo en una de las 48 muestras analizadas (38 pacientes y 10 individuos sanos), lo que representó el 2.6% de la población con cáncer bucal. Con los resultados obtenidos en este trabajo se establece que la técnica DBD-FISH es fácil de aplicar en raspados de epitelio bucal y proporciona resultados rápidos y sensibles y se confirma que el daño al DNA está estrechamente asociado al proceso neoplásico en células bucales.

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