Desarrollo de anticuerpos de cadena sencilla contra la hormona del crecimiento humano.

Bermea de León, Kevin Christian (2015) Desarrollo de anticuerpos de cadena sencilla contra la hormona del crecimiento humano. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Introducción. La hormona de crecimiento humana (hGH) tiene como función más destacada el fomentar el crecimiento lineal de nuestro cuerpo. Su producción y liberación es inducida por el hipotálamo a través de la hormona liberadora de hormona de crecimiento (GHRH) e inhibida por la somatostatina. Una vez secretada, la hormona estimula su receptor (GHR) en el hígado, lo que hace que se libere el factor de crecimiento similar a la insulina (IGF-1), siendo este último el principal efector de este eje. Cuando la hGH es producida en exceso aparecen diversas patologías con importantes repercusiones clínicas, como lo son el gigantismo y la acromegalia, además de que también se ha visto producción local de esta hormona en algunos cánceres, como el cáncer de mama. El gigantismo y la acromegalia poseen una serie de complicaciones que incluyen problemas cardiovasculares, deformidades óseas, aumento en el riesgo de desarrollar diabetes y cáncer. Debido a que la principal causa de sobreproducción de hGH son los tumores hipofisarios, la terapia inicial para el gigantismo y la acromegalia consiste en la escisión quirúrgica de estos tumores. Sin embargo, la tasa de éxito oscila entre un 50-80% y el resto de los pacientes deben someterse a una terapia farmacológica de por vida. Actualmente existen tres grupos de fármacos los cuales se administran en estos pacientes, los antagonistas del GHR, análogos de la somatostatina y agonistas de la dopamina. La eficacia del tratamiento se monitorea a través de los niveles de IGF-1. Desafortunadamente se necesita la combinación de por lo menos dos fármacos para alcanzar los niveles de IGF-1 óptimos y evitar las complicaciones de estas enfermedades. Los fármacos actuales se asocian a una serie de efectos adversos o limitaciones que incluyen molestias digestivas y aumento en el riesgo de desarrollar colecistolitiasis para el caso de los análogos de la somatostatina; alto costo para el caso de los antagonistas del GHR y pobre eficacia como monoterapia para la carbegolina. Objetivo. Este proyecto pretende desarrollar un anticuerpo de dominio único contra la hGH y con éste, dar pauta para el desarrollo de un nuevo inhibidor de la hGH con un blanco que no se había intentado antes, el secuestro directo de la hGH. Metodología. Para el desarrollo de esta molécula se partió de una biblioteca de anticuerpos de dominio único (sdAbs) inmune y una nativa, ambas provenientes del tiburón cornudo Heterodontus francsici, a estos anticuerpos se les conoce como nuevos receptores de antígeno variables (VNARs). Los anticuerpos provenientes de esta especie tienen como ventaja una mayor producción, mayor solubilidad, menor tendencia a la agregación y mayor termoestabilidad, lo cual facilita su producción biotecnológica. La selección de los anticuerpos se realizó utilizando la técnica de despliegue de fagos. Una vez terminadas las rondas de selección se enviaron a secuenciar los insertos para corroborar que la secuencia aminoacídica del producto proteico correspondiera a la de un VNAR. A partir de las clonas obtenidas se extrajo el vector y se introdujo a una cepa de Echerichia coli para su producción biotecnológica. Finalmente fueron confrontados contra la hGH en un ensayo de ELISA para evaluar su capacidad de reconocimiento.

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