Efecto del silenciamiento del gen WT-1 con ARNi en combinación con drogas anticancerígenas en modelo In vitro y en un modelo murino con metástasis a pulmón.

Thompson Armendáriz, Fernanda Guadalupe (2018) Efecto del silenciamiento del gen WT-1 con ARNi en combinación con drogas anticancerígenas en modelo In vitro y en un modelo murino con metástasis a pulmón. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

La proteína del tumor de Wilms (WT1) tiene un papel en la regulación genes del crecimiento, diferenciación y proliferación celular, suprime el crecimiento celular y tumorigenecidad, regula directamente la vía apoptótica mediante la inducción de genes proapoptóticos . Además, es un oncogén sobreexpresado en diversos carcinomas, incluyendo el pulmonar, y se han utilizado oligos antisentidos para wt1 que suprimen el crecimiento celular de líneas pulmonares (Oji et al., 1999). Recientemente, wt1 se ha considerado como un regulador transcripcional de la angiogénesis, su silenciamiento mediante ARNi reduce la proliferación y migración de células vasculares endoteliales humanas in vitro (Timar et al., 2005) y al combinarse con drogas quimioterapéuticas sensibiliza a diferentes líneas celulares de cáncer pulmonar al efecto citotóxico de las drogas (Yonesaka et al., 2006). Por lo tanto, wt1 es un buen blanco de estudio para el desarrollo de estrategias de terapia génica y su silenciamiento podría tener un beneficio dual, primero reduciendo la proliferación celular del tumor y segundo, inhibiendo la angiogénesis tumoral. En este trabajo investigamos el potencial de wt1 como blanco terapéutico, mediante la exposición de la línea de melanoma murino B16F10 a un complejo de ARNi contra wt1 (ARNi-wt1) en combinación con drogas quimioterapéuticas (Gemcitabina y Cisplatino), donde se observó un efecto sinérgico al combinar dichos tratamientos mediante un isobolograma; a su vez, se realizó un ensayo clonogénico, obteniendo una disminución en el número de focos celulares; en las técnicas de PCR se observó un decremento en la expresión de wt1 y del gen apoptótico bcl2; y en la prueba de citometría se encontró una disminución de la viabilidad celular por apoptosis del 22%. In vivo, en ratones C57Bl6 con metástasis a pulmón por la línea de melanoma murino B16F10, se aplicó un sistema de aerosol dirigido a pulmones para la deliberación del ARNi-wt1, donde se observó la sobrevivencia del 100% y un valor de progresión de 0. En conclusión, la politerapia presenta un efecto sinérgico contra el cáncer pulmonar en murino, sin embargo se requieren más estudios para evaluar su eficiencia. ABSTRACT Wilms tumor protein (WT1) plays a role in transcriptional regulation, involving different signaling cascades: regulating growth genes, cell differentiation and proliferation, suppresses cell growth and tumorigenecity, directly, regulates the apoptotic pathway by inducing proapoptotic genes (Morrison et al., 2005) and negatively regulated receptors involved in the balance of survival and death signals (Menke et al., 1997). In addition, it is an oncogene overexpressed in various carcinomas, including the lung, and antisense oligos have been used for wt1 that suppress the growth of lung cell lines (Oji et al., 1999). Recently, wt1 has been considered as a transcriptional regulator of angiogenesis, its silencing by RNAi reduces the proliferation and migration of human endothelial vascular cells in vitro (Timar et al., 2005) and when combined with chemotherapeutic drugs sensitizes different cell lines of lung cancer to the cytotoxic effect of drugs (Yonesaka et al., 2006). Therefore, wt1 is a good target for the development of gene therapy strategies and its silencing could have a dual benefit, first reducing tumor cell proliferation and second, inhibiting tumor angiogenesis. In this work we investigated the potential of wt1 as a therapeutic target by exposing the murine melanoma line B16F10 to a complex of RNAi against wt1 (RNAi-wt1) in combination with chemotherapeutic drugs (Gemcitabine and Cisplatin), where a synergistic effect was determine by a isobologram; besides, a clonogenic test was performed, obtaining a decrease in the number of cell foci; in the PCR techniques a decrease in the expression of wt1 and the apoptotic gene bcl2 was observed; and in the cytometric test, a reduction in cell viability by apoptosis of 22% was found. In vivo, in C57B16 mice with lung metastases by the B16F10 murine melanoma line, a lung-directed aerosol system was applied for the deliberation of the RNAi-wt1, where 100% survival and a progression value of 0. In conclusion, the combination therapy has a synergistic effect against murine lung cancer, however further studies are needed to evaluate its efficiency.

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