Evaluación del efecto de oligonucleotidos CpG en la proliferación y producción de citocinas en células de melanoma murino B16F10

Rodríguez García, Ramiro Joel (2017) Evaluación del efecto de oligonucleotidos CpG en la proliferación y producción de citocinas en células de melanoma murino B16F10. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Los avances in vitro e in vivo en el tratamiento contra cáncer, han llevado a descubrir nuevos agentes inmunoterapéuticos, como los oligonucleótidos CpG, que son secuencias sintéticas no metiladas que emulan el ADN bacteriano. En este trabajo, evaluamos in vitro el efecto de diferentes CpG en la proliferación y producción de citocinas Th1, Th2 y Th17en células de melanoma murino B16F10. Para ello, primeramente analizamos el nivel de expresión basal del receptor tipo Toll 9 (TLR9) por RT-PCR y Western blot, posteriormente, se evaluó la proliferación celular mediante ensayo de MTT y se realizó la cuantificación de citocinas en sobrenadante de cultivo celular, mediante citometría de flujo. En los resultados obtenidos, se observó una alta expresión de TLR9 a nivel de RNAm y proteína, lo que constituye el primer reporte científico de la expresión de TLR9 en células B16F10. Se observó que a una concentración de 50 µg/ml, el CpG 1826 reduce en un 40% la proliferación celular, además este CpG fue capaz de inducir la secreción de altos niveles de IL-10, una citocina anti-inflamatoria. En conjunto, los resultados sugieren un rol biológico de TLR9 en la proliferación de células B16F10, proponiendo su uso como monoterapia dirigida directamente a la célula tumoral, prestando atención en sus propiedades inmunomoduladoras que podrían tener un efecto detrimental sobre el sistema inmunológico en el microambiente tumoral. ABSTRACT In vitro and in vivo advances in cancer treatment have led to the discovery of novel immunotherapeutic agents, such as the CpG oligonucleotides, which are unmethylated synthetic sequences that emulate bacterial DNA. In this work, we evaluated in vitro the effect of different CpG on the proliferation and production of Th1, Th2 and Th17 cytokines in B16F10 murine melanoma cells. In order to do this, we first analyzed the basal expression level of the Toll-like receptor 9 (TLR9) by RT-PCR and Western blot; subsequently, cell proliferation was evaluated by MTT assay and cytokine quantification was performed in cell culture supernatant, by flow cytometry. In the obtained results, a high expression of TLR9 at mRNA and protein level was observed, which constitutes the first scientific report of the expression of TLR9 in B16F10 cells. It was observed that a concentration of 50 μg / ml, CpG 1826 reduces cell proliferation by 40%, in addition this CpG is able to induce the secretion of high levels of IL-10, an anti-inflammatory cytokine .Overall, the results suggest a biological role of TLR9 in the proliferation of B16F10 cells, proposing its use as monotherapy directed directly to the tumor cell, paying attention to its immunomodulatory properties that could have a detrimental effect on the immune system in the tumor microenvironment.

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