Producción de la enzima lignina peroxidasa H8 en la levadura metilotrófica Pichia pastoris

Nava Ríos, José Luis (2019) Producción de la enzima lignina peroxidasa H8 en la levadura metilotrófica Pichia pastoris. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

La producción de enzimas del complejo degradador de la madera es importante para un amplio rango de actividades industriales, tal es el caso de la lignina peroxidasa que es usada en el pretratamiento del material lignocelulósico en procesos de biorefinado y la degradación de compuestos tóxicos como colorantes, hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs), nanomateriales y antibióticos mediante estrategias de biorremediación. Adicionalmente se le han atribuido funciones de producto con alto valor agregado como agente despigmentante, biosensor o en la generación de aditivos alimenticios (ácido ferúlico y vainillina) y biocombustibles basados en la conversión de lignina. Lo anterior hace que su producción recombinante sea de interés biotecnológico. Los esfuerzos previos de clonación han generado resultados desalentadores siendo los más comunes: bajo rendimiento, baja actividad y la necesidad de procesos adicionales para favorecer el correcto plegamiento. En el presente trabajo se exploró una alternativa para solventar estos inconvenientes mediante la producción heteróloga de la enzima lignina peroxidasa H8 en la levadura metilotrófica Pichia pastoris, además se implementó una estrategia de optimización de codones basada en emular el perfil de uso de codones presente en el organismo nativo en la secuencia de interés a insertar en el organismo hospedero. Objetivo: Expresar y caracterizar la isoforma H8 de la enzima lignina peroxidasa en la cepa GS115 de Pichia pastoris. Metodología. Se diseñó una secuencia con armonización de codones de la isoforma del gen LiPH8 de la lignina peroxidasa de Phanerochaete chrysosoporium y se envió a sintetizar artificialmente en el vector de expresión para levaduras pPIC9K.

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