Caracterización parcial de la principal actividad fosfolipasa tipo A1 Y A2 en subfracciones de Trichomonas tenax

García Muñoz, Edna Marbella (2019) Caracterización parcial de la principal actividad fosfolipasa tipo A1 Y A2 en subfracciones de Trichomonas tenax. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Se tenía la seguridad de que solo las bacterias formaban los cálculos dentales en la boca de las personas con enfermedades periodontales. En la actualidad, se han demostrado la presencia hongos, micoplasmas, amebas y Trichomonas tenax. Existen evidencias científicas suficientes para implicar a T. tenax en diversos procesos infecciosos que se llevan a cabo fuera de los límites de la cavidad bucal como en: a) absceso pulmonar o bronconeumonía, b) relacionado con cáncer pulmonar, c) líquido cerebroespinal, d) en pus de absceso sub-hepático, e) fibrosis quística en seno. Hasta la fecha solo se ha descrito actividad enzimática de cisteín-proteasas en T. tenax. Hasta ahora no se han caracterizado actividades fosfolipasas de tipo A1 y A2 en T. tenax. Estas enzimas se les ha involucrado estrechamente en diferentes procesos fisiológicos para la destrucción celular como: I) recambio de fosfolípidos en las biomembranas, II) digestión en los fagosomas, III) neurotoxicidad y citotoxicidad en venenos muy activos de hongos, celenterados, insectos, arácnidos y reptiles y IV) en procesos inflamatorios. El objetivo del presente trabajo fue encontrar y caracterizar parcialmente la actividad de fosfolipasas tipo A1 y A2 en subfracciones celulares (S30 y P30), así como en extracto total de T. tenax. Para cumplir dicho objetivo realizamos cinéticas de crecimiento en donde determinamos el tiempo de generación (12h 37 min) y el tiempo de duplicación (8h 44 min) de la cepa de T. tenax ATCC-30207, cultivada en medio TYI-S-33. Obtuvimos el extracto total y las subfracciones, S30 y P30, a partir de un cultivo masivo. Una vez obtenidas y cuantificado las proteínas de las subfracciones P30 y S30, junto con el extracto total se determinó la actividad fosfolipasa del tipo A1 y A2 por el método de radioensayo, en donde encontramos que ambas actividades fosfolipasa, cuyo pH óptimo es de 8 (PLA1) y 6 (PLA2), ambas dependientes del tiempo, la dosis y la concentración de Calcio. Nuestro grupo ha identificado la presencia por primera vez de la actividad fosfolipasa A1 y A2 en T. tenax. Con estos resultados demostramos que la actividad fosfolipasa se debe a una actividad enzimática, ya que fue dependiente tanto del tiempo de incubación, así como de la dosis-respuesta. Con estos resultados también identificamos el tipo de fosfolipasa A1 y A2 de T. tenax. ABSTRACT Lately, we were convinced that only bacteria formed dental calculus in the mouths of people with periodontal diseases. At present, the presence of fungi, mycoplasmas, amoebae and Trichomonas tenax have been demonstrated. There is sufficient scientific evidence to implicate T. tenax in various infectious processes that take place outside the limits of the oral cavity as in: a) lung abscess or bronchopneumonia, b) related to lung cancer, c) cerebrospinal fluid, d ) in pus of sub-hepatic abscess, e) cystic fibrosis in breast. To date, only enzymatic activity of cysteine proteases has been described in T. tenax. Until now, phospholipase activities of type A1 and A2 in T. tenax have not been characterized. These enzymes have been closely involved in different physiological processes that are important for cell destruction, such as: I) phospholipid replacement in bio-membranes, II) digestion in phagosomes, III) high levels of neurotoxicity and cytotoxicity in poison of mushroom, coelenterates, insects, arachnids and reptiles and IV) in inflammatory processes. The aim of the present work is to find and characterize partially the activity of phospholipases type A1 and A2 in cellular subfractions (S30 and P30), as well as in the total extract of T. tenax. To achieve this, we performed growth kinetics and we determined the generation time (12h 37 min) and doubling time (8h 44 min) of the strain of T. tenax ATCC-30207, cultivated in TYI-S-33 medium. We obtained the total extract and the subfractions, S30 and P30, from a mass culture. Once the proteins of the P30 and S30 subfractions were obtained and quantified, together with the total extract, the phospholipase activity of type A1 and A2 was determined by the radioassay method, where we found that both phospholipase activities, whose optimal pH is 8 (PLA1) and 6 (PLA2), both dependent on time, dose and concentration of Calcium. Our team has identified the presence for the first time of the phospholipase activity A1 and A2 in T. tenax. With these results we showed that the phospholipase activity is due to an enzymatic activity, since it was dependent on both the incubation time and the doseresponse. With these results we also identified the type of phospholipase A1 and A2 present in T. tenax.

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