Expresión y localización de WT1 en la afección renal asociada a un proceso inflamatorio.

Arellano Rodríguez, Mariela (2019) Expresión y localización de WT1 en la afección renal asociada a un proceso inflamatorio. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Las enfermedades renales se definen por la pérdida de proteína en la orina, pueden ser ocasionadas por varias entidades patológicas resultando en un proceso inflamatorio que puede ocasionar glomerulonefritis, que es común entre los diferentes tipos de daño renal. El gen del tumor de Wilm’s (WT1) codifica para un factor de transcripción que modula la expresión de Nefrina y Podocalixina, proteínas necesarias para la estabilidad del podocito y la filtración glomerular. En pacientes con síndrome nefrótico resistentes a corticoesteroides, se ha observado una disminución y des-localización nuclear de WT1, por lo que el objetivo de esta tesis fue determinar el efecto de citocinas proinflamatorias sobre el patrón de expresión de WT1, proteínas moduladas y su relación con las enfermedades renales en un modelo murino. Para inducir la inflamación se formaron 6 grupos que se les administró con Lipopolisacárido (LPS) y fueron analizados a diferentes tiempos (12, 24, 36, 48 y 72 h) y un grupo control con solución salina. El daño renal se determinó mediante histología presentando proliferación de células mesangiales, se cuantificaron proteínas totales en orina por el método de Lowry y la albúmina mediante SDS-PAGE mostrando una mayor concentración a las 24 y 36 h posterior al tratamiento. La concentración de TNFα, IL-1β e IL-6 en suero de ratones se determinó mediante ELISA, con una mayor concentración a las 36 h para TNFα (4.44±0.1 ng/mL) e IL-1β (17±0.5 ng/mL) estadísticamente significativa comparado con el grupo control (2.3±0.2; 7±2, con p<0.05) con un incrementó de IL-6 a las 12 h (49.96±5 ng/mL, p<0.0001). Los resultados mostraron la disminución del RNAm por RT-PCR y la proteína de WT1 mediante Western blot a lo largo del proceso inflamatorio, así como una deslocalización nuclear y fosforilación de la proteína por Inmunofluorescencia e Inmunihistoquímica, mostrando una disminución en la expresión del RNAm de Nefrina. Por lo tanto, el proceso inflamatorio juega un papel importante en el daño renal principalmente por las citocinas proinflamatorias IL-1β y TNFα que modulan post-transcripcionalmente a WT1 suprimiendo su función de factor de transcripción que conduce a la disminución de las principales proteínas que forman la barrera de filtración y conduciendo a la pérdida de proteínas a través de la orina como principal síntoma de falla renal. Por lo que posteriormente se pretende determinas si las citocinas proinflamatorias modulan la expresión de proteínas antiinflamatorias como IL10 a través de WT1 en riñón.

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