Uso de monocitos como acarreadores de nanopartículas magnéticas, acomplejadas con quitosán/ADN para el envío dirigido a tumor.

De la Hoz Camacho, Rafael (2019) Uso de monocitos como acarreadores de nanopartículas magnéticas, acomplejadas con quitosán/ADN para el envío dirigido a tumor. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Los sistemas de envío basados en nanoestructuras han demostrado ser una herramienta muy útil para proponer nuevos tratamientos contra cáncer. Estos sistemas pueden ser sintetizados para responder a necesidades específicas de la terapia, pero algunos de ellos tienen que ser inoculados directo a tumor porque no poseen buena biocompatibilidad. El objetivo principal de esta investigación fue desarrollar un microbot, capaz de focalizar y controlar el envío y la expresión de genes en tejidos blanco como tumores, usando monocitos como acarreadores, acomplejados con nanopartículas magnéticas fluorescentes, quitosan y ADN. Las nanopartículas magnéticas fluorescentes fueron acomplejadas con quitosan y ADN (usando como plásmido reportero pHRE_Luc, que contiene en su región promotora seis elementos de respuesta a hipoxia) siguiendo la metodología de gelación iónica. Los nanocomplejos fueron caracterizados en tamaño, potencial zeta y citotoxicidad usando la técnica de XTT. Los monocitos se obtuvieron de ratones C57BL/6 hembras de 6-7 semanas por punción cardiaca y estos fueron separados posteriormente por gradiente de densidad. Los microbots fueron sintetizados usando un millón de monocitos con 50 µg de nanocomplejos. Finalmente, hembras de 6-8 semanas C57BL/6 fueron inoculadas de manera subcutánea con células B16F10 de melanoma murino y fueron separadas en 5 grupos de tres ratones cada uno. Después de 10 días de generación del tumor, el primer grupo fue tratado con microbots y fueron guiados a la zona tumoral mediante un campo magnético externo generado por un imán de neodimio de 3T, el segundo grupo fue tratado únicamente con microbots, el tercer grupo fue inoculado con nanocomplejos y aplicando el campo magnético, el cuarto grupo fue tratado con nanocomplejos únicamente para conocer la biodistribución y el quinto grupo fue tratado con PBS y usado como control negativo. A las 48 horas los animales fueron sacrificados siguiendo la norma mexicana MX-NOM-062-ZOO-1999. Pulmones, hígado, corazón, riñones, bazo y tumor fueron removidos y macerados para determinar la eficiencia del sistema mediante la fluorescencia de las nanopartículas magnéticas fluorescentes la expresión génica fue medida por luminiscencia. Los resultados mostraron que el sistema tiene la capacidad de llegar al tumor con alta especificidad y es una opción muy viable para sistemas de envío de genes a tumor.

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