Efecto de la azitromicina en la producción de Biofilm y su composición en aislamiento clínicos de Acinetobacter baumannii

Lara Medrano, Reynaldo (2017) Efecto de la azitromicina en la producción de Biofilm y su composición en aislamiento clínicos de Acinetobacter baumannii. Especialidad thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Materiales y Métodos: Los aislamientos de A. baumannii seleccionados se probarán a través de un método semi-cuantitativo de tinción de cristal violeta y se determinará el índice de biofilm. Los aislamientos se ensayarán de manera cuádruple en 2 experimentos diferentes llevado a cabo en diferentes días. Se inocularán alícuotas de suspensión bacteriana (100 uL) dentro de pocillos individuales e incubados a 37°C por 48 horas. Después de la incubación, las células planctónicas serán transferidas a una nueva placa de microtitulación de fondo plano, y su DO será leída en un lector de placas ELISA a una longitud de onda de 600 nm. Posterior a esto, los biofilms serán lavados 2 veces con 200 uL de solución salina amortiguada con fosfato (pH 7.40). Cuando el biofilm esté seco, se teñirá con 100 uL de cristal violeta 0.1% por 30 minutos a temperatura ambiente. El exceso de cristal violeta será removido con 200 uL de solución salina amortiguada por 5 veces. Finalmente, el biofilm teñido será resuspendido en 200 uL de etanol al 95%, para que la medición sea homogénea. La DO de los pocillos será medida a 595 nm. Para determinar el nivel de producción de biofilm se utilizará la clasificación de Christensen et al, ya que a la fecha no existen métodos para definir la producción de biofilm por A. baumannii. Los aislamientos con DO ≥ 0.25, de 0.15 a 0.24, y ≤ 0.14 serán considerados productores de biofilm fuerte, moderado y débil, respectivamente. El índice de biofilm se definirá con la relación entre células planctónicas y de biofilm (DO células planctónicas/DO células de biofilm). Este mismo ensayo se reproducirá añadiendo las concentraciones seleccionadas de azitromicina al caldo soya tripticaseína con 1% de glucosa. Staphylococcus saprophyticus ATCC 15305 (biofilm positivo) será usada como organismo de control de este ensayo. Resultados: De 140 aislamientos productores fuertes de biofilm, se seleccionaron 95 con losque se realizarían el resto de ensayos correspondientes. Se utilizaron concentraciones de 1, 2, 4 y 8 y 16 mcg/mL para determinar el MIC de nuestras cepas en células planctónicas a través del método de microdilución en caldo propuesto por el CLSI (en caso que no se determinara el MIC, se incrementaría de manera progresiva las concentraciones de azitromicina). El MIC se estableció en 8 mcg/mL, y la concentración mínima subinhibitoria en 4 mcg/mL. Conclusiones: El índice de biofilm fue más bajo cuando este se desarrolló en concentraciones subinhibitorias de azitromicina, por lo que este antibiótico podría ser útil como coadyuvante en el tratamiento de infecciones causadas por aislamientos A. baumannii productores de biopelícula.

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