Terapia alternativa de células dendríticas cargadas con exosomas derivados de tumor venéreo transmisible.

Ramos Zayas, Yareellys (2018) Terapia alternativa de células dendríticas cargadas con exosomas derivados de tumor venéreo transmisible. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

La inmunoterapia celular estimula y restaura las defensas naturales del sistema inmune para combatir el cáncer. Las células dendríticas (CD) son células especializadas del sistema inmune y su función es capturar, procesar y presentar antígenos a los linfocitos para iniciar una respuesta inmune. Una nueva fuente de antígenos para las CD son los exosomas, pequeñas vesículas (30-120 nm) que contienen ARN, ADN y proteína. Se han identificado proteínas tales como tetraspaninas (CD9, CD63, CD81), proteínas de choque térmico (Hsp), moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) de clase I y II y antígenos asociados a tumores (AAT). Un excelente modelo in vivo para estudios de inmunoterapia es el tumor venéreo transmisible canino (TVTC), uno de los cuatro tumores transmisibles en el mundo, es un cáncer transmisible en perros que afecta principalmente los genitales externos y se transmite durante el coito. En este trabajo utilizamos CD pulsadas con exosomas de TVTC como tratamiento en caninos con TVT. Para estudiar la inmunoterapia, se usaron tres grupos experimentales: grupo no vacunado; vacunados con exosomas de TVTC y vacunados con CD pulsadas con exosomas de TVTC. Para la inmunoterapia, se realizó un cultivo primario de células de TVTC, se aislaron los exosomas de TVTC y se caracterizaron por un ensayo de microscopía de transmisión electrónica, dot blot y cuantificación de proteínas. Luego se extrajo el 4% de sangrea los pacientes para diferenciar monocitos en CD. Para evaluar el efecto de la inmunoterapia con CD se observaron efectos secundarios, tamaño tumoral, poblaciones de linfocitos y los niveles de IFN-γ en suero sanguíneo. Los exosomas aislados de TVTC mostraron una muestra homogénea con una forma circular de aproximadamente 90 nm. En el dot blot, todos los marcadores de proteína (CD81, CD63, CD9 y Hsp70) fueron positivos, excepto el control (albúmina). La cuantificación de proteínas de cinco muestras representativas de los exosomas fue de 9.15 mg/mL, 13.65 mg/mL, 10.21 mg/mL, 11.43 mg/mL y 10.79 mg/mL. Los monocitos se diferenciaron en CD y se sometieron a un análisis fenotípico mediante citometría de flujo. Los monocitos mostraron una expresión de 85.71% para CD14+, 12.3% para CD80+, 0.1% para CD83+ y 0.8% para DLA II. Las CD mostraron5.1% para CD14+, 86.7% para CD80+, 90.1% para CD83+ y 92.6% para DLA II y un porcentaje de fagocitosis de 63% que se obtuvo mediante la prueba de FITC-Dextran. No se observó ningún efecto secundario en nuestro grupo experimental para nuestra terapia y la regresión tumoral fue del 100% durante la séptima semana. Un aumento de expresión en la población de CD4+de28% y de 34% en la población de CD8+ y los niveles de IFN-γ aumentaron a 142 pg/mL. Estos resultados muestran que lasCD pulsadas con exosomas tumorales inducen la regresión del TVT en perros.

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