Polimorfismo de los genes que codifican para las proteínas VP4, VP7 y NSP4 de rotavirus y su asociación con la severidad de la diarrea

González Ochoa, Guadalupe (2006) Polimorfismo de los genes que codifican para las proteínas VP4, VP7 y NSP4 de rotavirus y su asociación con la severidad de la diarrea. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

De los virus que provocan gastroenteritis, rotavirus es el principal agente causal de diarreas severas provocando la muerte de cerca 440,000 niños por año a nivel mundial. Algunos estudios señalan a las proteínas VP4, VP7 y NSP4 como factores de patogenicidad; VP4 y VP7 se involucran en procesos de ingreso del virus a la célula y en la producción de anticuerpos de neutralización; NSP4 es la única proteína descrita como enterotoxina, la cual, mediante un incremento en Ca2+ desencadena los procesos diarreicos. Hasta el momento, no se conocen los mecanismos por los cuales rotavirus puede causar una gastroenteritis severa. Por lo que el objetivo del presente trabajo es determinar si existe una correlación entre el polimorfismo de los genes que codifican para VP4, VP7 y NSP4 con los casos severos de diarrea. Se analizaron 123 muestras de heces de niños menores de 5 años colectadas de Octubre de 2004 a Marzo de 2005. La presencia del RNA característico de rotavirus se determinó a través de electroforesis en un sistema continuo. Posteriormente el RNA se sometió a RT-PCR para determinar los genotipos VP4, VP7 y NSP4. Los productos de PCR fueron desnaturalizados y sometidos a un sistema de SSCP para detectar el polimorfismo intragenotípico de las cepas de estudio y someter a una población representativa a secuencia de nucleótidos. Los resultados muestran que 64 (52%) de las cepas presentaron el modelo de migración característico de rotavirus. Con respecto a VP7 y VP4 el genotipo que predominó fue G1P[8] (34%), para NSP4 el genotipo Wa (65%) fue el que más se presentó. Por otro lado, las variaciones intragenotípicas detectadas en los genes que codifican para VP4 y VP7 mostraron tres modelos de migración y no se detectó una asociación con la severidad de la gastroenteritis. Por su parte, para NSP4, se detectaron 5 modelos de variación intragenotípica, mismos que se correlacionaron con el grado de deshidratación (P<0.05). Los análisis de secuencia de los modelo indicó variaciones en la regiones de aa 115- 140 para los modelos 1,2,3 y 5; pero no para el modelo 4, mismo que se relacionó con los casos más severos. Estos resultados muestran que VP7 y VP4 no están involucrados en la severidad de la infección y que NSP4 además de ser un factor de infecciones sintomáticas, como lo han reportado algunos investigadores, también puede ser un factor de la severidad de la gastroenteritis, indicando la importancia de estudiar este gen y la proteína que codifica para tener un mayor conocimiento de la patogénesis de la gastroenteritis por rotavirus. Abstract Of the viruses that cause gastroenteritis, rotavirus is the main causal agent of severe diarrhea; it causes the fence death 440,000 children per year at world-wide level. Some researchers point to proteins VP4, VP7 and NSP4 like pathogenicity factors; VP4 and VP7 are related with the penetration viral into epithelial cells and the synthesis of neutralization antibodies; NSP4 is the first described viral enterotoxin, which, by means of an increase in Ca2+ it triggers the diarrheic processes. At the moment, are not known the mechanisms by which rotavirus can cause a severe gastroenteritis. The goal of the present work is determine if exist a correlation between the polymorphism of the genes codifies for VP4, VP7 and NSP4 with the severe cases of diarrhea. On this study were analyzed 123 samples of diarrheic faeces of children less than five years old. The presence of the RNA characteristic of rotavirus was determined by electroforesis in a continuous system. The VP4, VP7 and NSP4 genotypes were determined through RT-PCR. To detect the intragenotípic polymorphism, the PCR products were analyzed by SSCP. The results show that 64 (52%) of the samples presented the model of migration characteristic of rotavirus. The genotypes G1P[8] (34%) and Wa (65%) were predominant in VP7-VP4 and NSP4, respectively. On the other hand, the detected intragenotipic variations in the genes that codify to VP4 and VP7 was not associated to the severity of the gastroenteritis; it was not the case for NSP4, where the five different models from intragenotipic variation were detected, same that was correlated with the dehydration degree (P<0.05). The analysis of sequence of the models showed variations in the regions of aa 115-140 for the models 1, 2,3 and 5; but it does not to model 4, same that was related to the most severe cases. These results show that probably VP7 and VP4 are determining for the infection and the viral neutralization, but not thus for the severity of the gastroenteritis. On the other hand, NSP4 can influence in the presence of asymptomatic infections, it reported by some investigators, if not also in the severity of the gastroenteritis, indicating that NSP4 can be considered like an important factor of viral pathogenicity in natural infections.

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