Disección molecular de la interacción de TBP con las homeoproteínas Scr, Ubx y AbdB mediante BiFC en la línea celular HEK293

Montalvo Méndez, Rubén de Jesús (2020) Disección molecular de la interacción de TBP con las homeoproteínas Scr, Ubx y AbdB mediante BiFC en la línea celular HEK293. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Las homeoproteínas son factores transcripcionales que regulan la expresión de genes que definen la identidad de los segmentos en los organismos. Estos factores transcripcionales presentan una amplia multiplicidad de interacciones con otras moléculas como cofactores que aumentan su especificidad de unión al DNA y proteínas involucradas en la regulación de la expresión génica, entre las que se incluyen las de la maquinaria basal de transcripción como lo son BIP2, Med19, TFIIEβ, M1BP y TBP. En nuestro laboratorio se ha determinado que TBP interacciona con Antennapedia (Antp) y Abdominal A (AbdA) a través de la región rica en glutaminas de Antp y el HD de AbdA. Adicionalmente, existe evidencia de que los homopéptidos de glutaminas de TBP tienen una función transactivadora y son un dominio de interacción con TFs como TFIIB y Antp. Debido a la importancia de la interacción entre homeoproteínas y la maquinaria basal de transcripción en la regulación de la expresión génica y a la poca evidencia que existe, el propósito de esta tesis fue elucidar si TBP interacciona con Sex combs reduced (Scr), Ultrabithorax (Ubx) y Abdominal-B (AbdB), así como determinar los dominios funcionales involucrados. Para determinar las interacciones proteicas mediante Complementación Bimolecular Fluorescente en la línea celular HEK293 se cotransfectó el vector que codifica el extremo N-terminal de la proteína fluorescente Venus fusionado con TBP (o TBPΔQ) con los vectores que codifican al extremo C-terminal de Venus fusionado a las homeoproteínas Scr, Ubx y AbdB o sus homeodominios. En todos los casos la interacción se determinó mediante el análisis de la reconstitución de la fluorescencia de Venus con respecto a la fluorescencia de mCherry, utilizado como control. Los resultados obtenidos indican que TBP interacciona con Scr, Ubx y AbdB dando 72.39%, 70% y 94.91%, respectivamente, muy similar a la interacción con Antp. Estas interacciones son afectadas significativamente en ausencia del homopéptido de glutaminas de TBP disminuyendo a 24.57%, 34.16% y 49.22%, respectivamente. Además, al probar la interacción con los homeodominios se encontró que la interacción de estas homeoproteínas con TBP se reduce de forma significativa, dando 44.12%, 41% y 60.55%, respectivamente, indicando que otras regiones están involucradas en estas interacciones. Estos resultados indican que hay cierta similitud en los mecanismos interacción y por lo tanto en la regulación génica durante el desarrollo en Drosophila.

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