Análisis del efecto de las proteínas extracelulares de M. tuberculosis sobre la estabilización de HIF-1a y la activación de neutrófilos in vitro

Muñiz Buenrostro, Antonio (2024) Análisis del efecto de las proteínas extracelulares de M. tuberculosis sobre la estabilización de HIF-1a y la activación de neutrófilos in vitro. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

La tuberculosis pulmonar se caracteriza por la formación de un granuloma el cual esta compuesto por macrófagos alveolares, células espumosas, linfocitos, neutrófilos, fibroblastos y tejido conectivo. En el granuloma las células se enfrentan a un ambiente de hipoxia el cual estabiliza el factor inducible de hipoxia-1 alfa (HIF-1α). A su vez, Mycobacterium tuberculosis (Mtb) libera proteínas de secreción temprana las cuales modulan diferentes respuestas del sistema inmunitario en el granuloma. Se ha descrito que en la infección por Mtb, se aumenta la acumulación de HIF-1α en los macrófagos y neutrófilos, esto genera un efecto dual el cual es protector en la fase aguda de la infección y en etapas tardías disminuye la eliminación de Mtb. El objetivo del estudio fue analizar el efecto de las proteínas extracelulares de M. tuberculosis H37Rv sobre la estabilización de HIF-1a y la activación de neutrófilos in vitro. Se utilizaron proteínas extracelulares de un cultivo de Mtb H37Rv en caldo Middlebrook 7H9, posteriormente las proteínas fueron precipitadas con sulfato de amonio y finalmente desalinizadas. Se utilizó SDS-PAGE para evaluar el patrón electroforético en el cual, cuatro proteínas con pesos de 6, 38, 49 y 62 kDa fueron las más abundantes. Los neutrófilos se aislaron de la sangre de individuos sanos y se incubaron con proteínas extracelulares de Mtb en condiciones de normoxia (O2 21%) e hipoxia (O2 1%) para evaluar la estabilización de HIF-1a y se evaluó la producción de ROS, formación de NETs y producción de IFN-g. Se determino expresión génica de HIF-1a y sus genes blanco VEGF y GLUT-1. Se detectó HIF-1a en neutrófilos estimulados con proteínas extracelulares de Mtb por western blot en normoxia e hipoxia. Los neutrófilos estimulados con las proteínas extracelulares de Mtb en hipoxia tuvieron un incremento en la producción de ROS, formación de NETs, producción de IFN-g y expresión de HIF-1a y VEGF. En conclusión, la estabilización de HIF-1α en los neutrófilos con las proteínas extracelulares de M. tuberculosis potencio la activación de los neutrófilos mejorando sus funciones microbicidas.

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