Extractos de cítricos como inhibidores del "quórum sensing" en campylobacter jejuni y su efecto sobre algunos factores de virulencia relacionados

Castillo Hernández, Sandra Loruhama (2014) Extractos de cítricos como inhibidores del "quórum sensing" en campylobacter jejuni y su efecto sobre algunos factores de virulencia relacionados. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

El Quórum Sensing (QS) es un sistema de señalización presente en bacterias que tiene influencia en una gran variedad de factores de virulencia. En el presente estudio se investigó la habilidad de extractos de cítricos para inhibir la actividad AI-2 del QS en Campylobacter jejuni y su habilidad para inhibir la movilidad, la formación de biopelículas, la capacidad de adhesión e invasión de Campylobacter a células HeLa y el efecto sobre la expresión de los genes: flaA, flaB (relacionados con la movilidad y formación de biopelícula), y ciaB y cadF (relacionados con adhesión e invasión). Se prepararon extractos acuosos de cáscara y bagazo de diferentes cítricos, se determinó la actividad antimicrobiana en pozo y la concentración mínima bactericida (CMB) contra C. jejuni. Se eligieron los extractos de C. limon, C. aurantium, C. medica por presentar las CMBs más bajas, oscilando entre 1.5 y 3mg/ml, utilizándose para los estudios posteriores. Se evaluó también el efecto de estos extractos sobre la formación de biopelícula de C. jejuni en microplacas de 96 pozos, donde se cultivó C. jejuni con y sin tratamiento con extracto. Se tiñó la biopelícula con safranina, y se midió la absorbancia en un lector de ELISA para determinar la cantidad de biopelícula formada, encontrándose una reducción concentración-dependiente en la mayoría de los casos. Para determinar el efecto sobre la movilidad de C. jejuni, se prepararon placas con 0.3% de agar Muller Hinton, se sembró en el centro una alícuota de C. jejuni previamente activada, se incubaron a 42oC/48h en las mismas condiciones y se midieron los halos de migración encontrándose una reducción por efecto de los extractos hasta en un 40%. Para relacionar la influencia de los extractos sobre el QS, se obtuvieron sobrenadantes de cultivos de C. jejuni y se mezclaron con los extractos. Se agregaron a los cultivos de V. harveyi BB170 y se midió la bioluminiscencia emitida. Se encontró que la actividad AI-2 del QS disminuyó significativamente comparado con el control después de la adición de extractos. Al realizar los ensayos de adherencia e invasión a células se encontró que la capacidad de adhesión de C. jejuni, no se redujo por efecto de los extractos; sin embargo, la invasión disminuyó en células tratadas con extracto comparadas con las no tratadas. Al determinar el efecto de la adición de extractos sobre la expresión de los genes de virulencia relacionados, se evidenció una disminución en la expresión de los genes flaA, flaB, cadF y ciaB en la mayoría de los casos.

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