Mecanismo de acción antiviral de polisacáridos sulfatados de algas sobre el virus de la enfermedad de newcastle y caracterización de mutantes resistentes

Elizondo González, Regina (2014) Mecanismo de acción antiviral de polisacáridos sulfatados de algas sobre el virus de la enfermedad de newcastle y caracterización de mutantes resistentes. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es responsable de una de las enfermedades infecciosas de las aves de corral mas importantes debido a su alta morbilidad y mortalidad, generando cuantiosas pérdidas económicas a nivel mundial. Su incidencia ha disminuido gracias a los programas de vacunación; sin embargo, continúan registrándose serios brotes de la enfermedad. Es por ello que surge la necesidad de desarrollar nuevas alternativas para la prevención y/o tratamiento de enfermedades virales que afectan a la industria avícola, los cuales deben ser prácticos, no tóxicos y altamente efectivos. Los polisacáridos sulfatados (PLS) extraídos de algas han demostrado tener diversas actividades biológicas, entre los cuales destaca el efecto antiviral observado en diversos virus envueltos, entre ellos el NDV. En este trabajo determinamos el mecanismo de acción antiviral del fucoidán de C. okamuranus sobre NDV. Para determinar el mecanismo de acción antiviral ejercido por el fucoidán de C. okamuranus durante la entrada y proceso de replicación de NDV se realizaron ensayos de inhibición de sincicios y UFP y se evaluó la síntesis de la proteína HN por inmunoelectrotransferencia e inmunofluorescencia demostrando una inhibición en las primeras etapas del ciclo viral (0-60 minutos post-infección) a concentraciones no tóxicas. Los ensayos de inhibición de fusión mostraron un efecto directo sobre la proteína ―F‖ inhibiendo eventos de fusión virus-célula y célula-célula. Por otro lado se seleccionaron mutantes de NDV resistentes al fucoidán y se clonaron y secuenciaron las regiones HN y F, a fin de determinar los puntos en donde se ejerce la presión selectiva, se encontraron 9 substituciones de aminoácidos en la proteína F ubicados entre los aminoácidos 341 al 359 que corresponde a un dominio de la proteína el cual es invariable en las estructuras pre y post fusión y 5 substituciones de aminoácidos en la proteína HN ubicados entre los aminoácidos 93 a 230; en donde se encuentra la región de interacción específica con F, dichos cambios podrían estar involucrados en la resistencia de NDV al fucoidán de C. okamuranus permitiendo su entrada a la célula. Se analizó la susceptibilidad de NDV frente al antiviral comercial ribavirina y el efecto del fucoidán sobre mutantes virales resistentes a la ribavirina encontrando que estas fueron tan susceptibles al tratamiento con fucoidán como la cepa wild-type. Nuestro estudio provee un mejor entendimiento sobre el mecanismo de acción de polisacáridos sulfatados de algas sobre virus envueltos y específicamente nos permite concluir que el fucoidán de Cladosiphon okamuranus representa una alternativa prometedora como terapia antiviral contra NDV.

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