Secuencia de la tanasa de Aspergillus niger GH1 y producción de la enzima en Pichia pastoris

Fuentes Garibay, José Antonio (2015) Secuencia de la tanasa de Aspergillus niger GH1 y producción de la enzima en Pichia pastoris. Doctorado thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Las tanasas o tanin acil-hidrolasas (EC 3.1.1.20), son enzimas con potencial biotecnológico. En el presente trabajo, se describen las secuencias nucleotídica y aminoacídica de la tanasa de Aspergillus niger GH1. Además, se construyerón cepas recombinantes de Pichia pastoriscapaces de producir y secretar la enzima, y la tanasa producida fue caracterizada bioquímicamente. La secuencia nucleotídica que codifica para la tanasa madura tuvo un tamaño de 1686 pb, y codifica para una proteína de 562 aminoacidos.Un modelo molecular de la proteína madura de la tanasa de A. niger GH1 mostró la prescencia de dos dominios estructurales, uno de ellos con un plegamiento α/β-hidrolasay un dominio de tapa que cubre el sitio catalítico, siendo probable que los residuos Ser-196, Asp-448, e His-494 conformen la triada catalítica, la cual está conectada por medio de un puente disulfuro entre las cisteínas vecinas, Cys-195 y Cys- 495. Un cultivo a nivel matraz de 120 mL con una cepa recombinante de P. pastoris construida mostró una actividad de tanasa extracelular a las 48 h de inducción de 0.57/mL. La tanasa producida fue N-glicosilada, consistió de dos subunidades, probablemente unidas por un puente disulfuro y presentó un pH óptimo de 5.0, y una temperatura óptima de 20ºC. Estas propiedades bioquímicas difieren de las propiedades de la tanasa nativa de A. niger GH1. La tanasa recombinante podría ser adecuada para aplicaciones en alimentos y bebidas.

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