Expresión de alcohol deshidrogenasa 1 β y su efecto sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer pulmonar a549.

Vizcarra Valdés, Jesús Baldomero (2016) Expresión de alcohol deshidrogenasa 1 β y su efecto sobre la viabilidad de la línea celular de cáncer pulmonar a549. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

El cáncer pulmonar es el tipo de cáncer con la más alta tasa de mortalidad a nivel mundial y los tratamientos actuales contra esta patología aún son subóptimos. Aumentar el conocimiento sobre las alteraciones moleculares más significativas que se encuentran en este tipo de cáncer ha generado mejores terapias. El gen ADH1 (Alcohol deshidrogenasa 1) ha sido identificado como disminuido a nivel de RNAm en tejido de carcinoma pulmonar y otros tipos de cáncer, sin embargo no se ha confirmado esto a nivel proteína y el papel de la enzima ADH1 en la fisiopatología del cáncer pulmonar se desconoce. Por lo que para confirmar su subexpresión se evaluó el nivel de expresión de la proteína ADH1 mediante Western blot en la línea celular de carcinoma pulmonar A549 y se comparó con la expresión de ADH1 de la línea celular normal pulmonar MRC5. Una vez que se confirmó la baja expresión a nivel proteína de ADH1 en la línea celular A549, se prosiguió a evaluar si el aumento de su expresión podría impactar en el metabolismo, viabilidad, y producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) de las células A549 con una mayor expresión de ADH1, debido a su transfección con el vector pCMV6-ADH1. Para ello se evaluó su capacidad metabólica utilizando un ensayo de MTT; posteriormente se evaluó la producción de ROS mediante el ensayo de DCFDA, y finalmente con el ensayo de Anexina V se evaluó la exposición de fosfatidil serina. Los resultados obtenidos indican que la línea A549 tiene una sub expresión a nivel proteína de la enzima ADH1 en comparación a la línea MRC5; las células A549 transfectadas con el vector pCMV6-ADH1 que expresan ADH1 exógenamente exhiben una capacidad metabólica disminuida; un nivel aumentado de ROS y de células con exposición de fosfatidil serina. Estos resultados sugieren que la expresión exógena de ADH1 en la línea celular A549 induce mecanismos celulares, aún desconocidos, que llevan a una disminución en la viabilidad relativa de las células y que además propician la exposición de la fosfatidil serina en la membrana externa de las células al mismo tiempo que inducen una mayor producción de ROS. Este estudio es el primero en demostrar la subexpresión de ADH1 en la línea celular de cáncer pulmonar A549 y en demostrar que su aumento tiene un papel en la biología celular de cáncer pulmonar.

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