Caracterización del mecanismo de resistencia a glicopéptidos en enterococos recolectados en dos hospitales de México

Luna de Alba, María Aurora (2019) Caracterización del mecanismo de resistencia a glicopéptidos en enterococos recolectados en dos hospitales de México. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Vancomicina y Teicoplanina son antibióticos utilizados para el tratamiento de infecciones por Enterococcus faecium y Enterococcus faecalis. La resistencia a glicopéptidos es debida al acarreamiento de los operones vanA y vanB, ambos operones pueden ser transferidos por plásmidos conugativos. La importancia de este estudio fue caracterizar el mecanismo de resistencia a glicopéptidos en aislamientos clínicos de Enterococcus spp. Obtenidos en un periodo de 6 años en dos hospitales de México. Se obtuvieron 560 aislamientos clínicos de E. faecium (n=79) y E. faecalis (n= 427) durante el periodo 2011 a 2017 de los estados de Nuevo León y Jalisco, México. Los aislamientos fueron identificados por MALDI-TOF MS. La susceptibilidad a antimicrobianos fue determinada por el método de microdilución en caldo de acuerdo a las recomendaciones del CLSI. Los genes vanA y vanB fueron determinados por PCR en plásmido y cromosoma. El perfil plasmídico fue obtenido por hidrólisis alcalina, y la transferencia horizontal de la resistencia a vancomicina fue realizada por ensayos de conjugación en fase sólida y líquida utilizando a Staphylococcus haemolyticus y E. faecalis como cepas receptoras. La resistencia a vancomicina fue del 16% y fue más frecuente en E. faecium (96.6%) que en E. faecalis (3.4%). Las tasas de resistencia fueron del 100% para vancomicina y ciprofloxacino, 98.8% para teicoplanina y levofloxacino, 97.7% para penicilina y ampicilina y 6.6% para daptomicina. Ninguno de los aislamientos fue resistente a linezolid. El gen vanA fue detectado en todos los aislamientos, mientras que el gen vanB no se detectó. El gen vanA se encontró integrado de foma simultánea en plásmido y cromosoma en un 58.8% de los aislamientos. Se obtuvieron 41 perfiles plasmídicos, con tallas moleculares de 0.3 a 234 kb. No se llevo acabo conugación bacteriana en ninguno de los aislamientos que acarreaban el gen vanA. Se identificaron 41 perfiles plasmídicos. La conjugación bacteriana no se llevo a cabo, lo cual sugiere que la diseminación de enterococos resistentes a vancomicina pudo darse por el fenómeno de expansión clonal. ABSTRACT Vancomycin and teicoplanin are used in the treatment of infections by Enterococcus faecium and Enterococcus faecalis. Glycopeptide resistance is due to the carriage of vanA or vanB clusters, both operons can be transferred by conjugative plasmids. The aim of this study was to characterize the mechanism of glycopeptide resistance in clinical isolates of Enterococcus spp. obtained in a 6 year from two hospitals in Mexico. Five hundred and sixty clinical isolates of Enterococcus faecium (n=79) and Enterococcus faecalis (n=427) from 2011 to 2017 were obtained from Nuevo Leon and Jalisco in Mexico. Isolates were identified by MALDI-TOF MS. Antimicrobial susceptibility was determined by the broth dilution method according to the CLSI. vanA and vanB genes were determined by PCR in both plasmids and chromosome. The plasmid profile was obtained by alkaline hydrolysis, and the horizontal transfer of vancomycin resistance was performed by liquid and solid-phase mating using Staphylococcus haemolyticus and E. faecalis as recipient strains. Resistance to vancomycin was 16%, which was more frequent in E. faecium (96.6%) than E. faecalis (3.4%). Resistance rates were for 100% for vancomycin and ciprofloxacin, 98.8% for teicoplanin and levofloxacin, 97.7% for penicillin and ampicillin and 6.6% for daptomycin. None of the isolates was resistant to linezolid. vanA gene was detected in all the isolates, whereas the vanB gene was not detected. vanA gene was identified integrated into both chromosome and plasmids in 58.8% of the isolates. Forty-one plasmid profiles were obtained, with plasmids with sizes of 0.3 kb to 234 kb. The conjugation was unsuccessful in all the isolates that harbored vanA gene. Forty-one different plasmid profiles were identified. The conjugation was unsuccessful in all the isolates, which suggest that the dissemination of vancomycin-resistant enterococci in the Mexican hospital could be by clonal expansion.

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