Efecto del motivo WRPW en la actividad funcional de antennapedia en Drosophila melanogaster

Villanueva Segura, Olga Karina (2007) Efecto del motivo WRPW en la actividad funcional de antennapedia en Drosophila melanogaster. Maestría thesis, Universidad Autónoma de Nuevo León.

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Resumen

Los genes homeóticos permiten el control genético del desarrollo de los diferentes organismos en la especificación del plan corporal. Estos genes presentan dos secuencias altamente conservadas: el homeobox que codifica a un péptido de 60 aminoácidos conocido como homeodominio (HD) que es el sitio de unión al DNA y el tetrapéptidoYPWM que se ha involucrado en interacciones proteína-proteína. Estos dominios estan presentes en la homeoproteína Antennapedia (Antp) que es un factor transcripcional que controla la formación de los segmentos torácicos en Drosophila melanogaster. Similarmente, la proteína Hairy contiene el motivo WRPW que es capaz de conferir actividad represora debido al reclutamiento del corepresor Groucho. Debido a que la actividad funcional de las diferentes proteínas homeóticas esta dada por un balance regulado por los mecanismos de activación/represión de las homeoproteínas para la regulación de los genes blanco, en esta tesis se realizó la adición del motivo de represión transcripcional WRPW, en el extremo C-terminal de Antp para determinar el efecto de un motivo de represión adicional en la actividad funcional de Antp durante el desarrollo embrionario y en la actividad de un gen blanco en D. melanogaster. Para cumplir con los objetivos se llevó a cabo la clonación de las secuencias nucleotídicas codificantes a Antp y sus mutantes con la fusión a WRPW en el vector pUAST. Los vectores recombinantes fueron microinyectados en embriones de moscas w1118 para la obtención de las líneas transgénicas, en las que se analizó la expresión ectópica de Antp quimérica usando el sistema binario GAL4-UAS mediante cruzas con la línea Hs-GAL4. Las larvas producto de las cruzas fueron analizadas para la determinación de los efectos fenotípicos producidos por la inserción AntpWRPW. El análisis de activación transcripcional del gen blanco tsh se realizó mediante cruzas genéticas con la línea patched-GAL4 para detectar el efecto del motivo WRPW en la actividad funcional de Antp. Los resultados obtenidos en esta tesis demuestran evidentemente que la adición del motivo WRPW en el extremo C-terminal de Antp incrementó la actividad funcional de esta homeoproteína en la transformación homeótica T1 a T2 y en la activación del gen blanco tsh. Adicionalmente, la presencia de WRPW en Antp con ausencia del tetrapéptido YPWM rescató el fenotipo de esta mutante sugiriendo la actividad similar de YPWM y WRPW como motivos de represión transcripcional. Sorprendentemente, el tetrapéptido YPWM de Antp mostró ser indispensable para la activación del gen blanco tsh en la región de la cabeza de los embriones de D. melanogaster debido a que la presencia de WRPW no afectó la activación de tsh. La importancia del análisis de las funciones activadoras ó represoras de las homeoproteínas es fundamental para entender el mecanismo por el cual éstas regulan los genes blanco. Los ensayos que se realizaron en esta tesis podrían complementarse al estudiar más genes blanco, como es el caso de fkh[250con ] ó apterous, que son regulados por Antp. Además, deberá analizarse en ensayos de interacción si realmente el correpresor Groucho esta siendo reclutando por la proteína mutante YPWMAntpWRPW, así como también el cofactor TAFII155 que podría ser la proteína que interacciona en la actividad de la homeoproteína Antp a través del tetrapéptido YPWM.

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